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在储存纯化蛋白质时保持凉爽

蛋白质及其功能的研究对于理解生物学**关重要,但从复杂混合物中分离和纯化单一蛋白质是一项艰苦的工作。投入时间后,使用各种色谱法纯化目标蛋白质 方法,由于储存不当而失去蛋白质完整性将是毁灭性的。如果您需要将蛋白质用于多个下游研究,良好的储存条件尤为重要。您可能需要长时间储存​​您的制剂,并且一些实验要求蛋白质保持其原始结构,结合亲和力或酶活性。**佳的储存条件是每种蛋白质和情况都不同的; 尽管如此,有可能提出一些蛋白质储存和稳定性的一般指导原则。以下是一些快速简单的建议,涉及浓度,添加剂,样品大小和储存温度,以便在储存蛋白质以备将来使用时考虑。

浓度

浓度在保持蛋白质在溶液中稳定方面起着关键作用。蛋白质需要以高浓度储存 - **少1 mg / ml。稀释蛋白质溶液(<1 mg / ml)由于与储存管的低水平结合而更容易失活和损失。因为在某些情况下浓度较高可能不太现实,所以通常的做法是将“载体”或“填充物”蛋白质(如纯化的牛血清白蛋白(BSA))加入1**5 mg / ml(0.1%)**0.5%),稀释蛋白质溶液并防止这种降解和损失。

添加剂

可以将许多化合物添加到蛋白质溶液中以延长保质期。您添加到蛋白质溶液中的含量取决于预期用途和纯化蛋白质的特性。例如,如果您纯化了用于蛋白质印迹或免疫沉淀实验等分析的抗体蛋白,您可以添加冷冻保护剂(如甘油或乙二醇)**终浓度为25%**50%,以帮助稳定蛋白质。这些添加剂有助于防止溶液在冷冻(-20°C)时凝固,防止形成破坏蛋白质结构的冰晶。聚乙二醇(PEG)和聚山梨醇酯(如吐温80)等聚合物也可以帮助保持冰晶,但浓度低得多(0.01%)。因为你的蛋白质制剂不会结冰,它可以多次使用而无需解冻。此外,在此浓度下,吐温80还可以帮助防止蛋白质与储存管结合。但是,冷冻保护剂杂质可能会影响蛋白质活性,因此您可能需要通过与供应商核实来采取措施确保所选试剂的质量。另一个考虑因素是尽管这些添加剂有利于抗体使用,但高粘度会影响某些下游程序中的蛋白质使用,例如额外的色谱步骤,蛋白质结合/相互作用测定或质谱分析,因此应考虑其他应用。因此,您可能需要通过与供应商核实,采取措施确保所选试剂的质量。另一个考虑因素是尽管这些添加剂有利于抗体使用,但高粘度会影响某些下游程序中的蛋白质使用,例如额外的色谱步骤,蛋白质结合/相互作用测定或质谱分析,因此应考虑其他应用。因此,您可能需要通过与供应商核实,采取措施确保所选试剂的质量。另一个考虑因素是尽管这些添加剂有利于抗体使用,但高粘度会影响某些下游程序中的蛋白质使用,例如额外的色谱步骤,蛋白质结合/相互作用测定或质谱分析,因此应考虑其他应用。

可以添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的蛋白水解切割,从而保持蛋白质完整。**终浓度为0。02%**0。05%(w / v)的抗菌剂如叠氮化钠(NaN3)或终浓度为0。01%(w / v)的硫柳汞抑制微生物生长。金属螯合剂如EDTA的终浓度为1**5mM,避免了金属诱导的巯基(-SH)基团的氧化,并有助于将蛋白质维持在还原状态。**终浓度为1**5mM的还原剂如二硫苏糖醇(DTT)或2-巯基乙醇(2-ME)也有助于通过防止半胱氨酸的氧化将蛋白质维持在还原状态。在将添加剂与蛋白质混合时,请记住,蛋白质溶液不应通过涡旋剧烈摇动。

如您所见,有许多添加剂选择。Bio-Rad等供应商提供方便尺寸的试剂,并提供使用添加剂的方案和提示。请务必阅读并规划下游实验,以确保正确的储存条件。

样本量

如果您确定使用甘油或乙二醇对您的应用不利,并且因为冻融循环会降低蛋白质的稳定性,您应该分配并准备一次性等分试样,这样一旦解冻,蛋白质溶液就不必是再冷冻。这些小等分试样可以使用一次。诀窍是提前计划并避免多次冻融循环。

温度

通常,蛋白质**好在≤4°C的温度下储存在干净,无菌的玻璃容器或聚丙烯管中。在室温下储存经常导致蛋白质降解和/或不活动。对于短期储存****几周,许多蛋白质可以储存在含有蛋白酶抑制剂的简单缓冲液中,温度为4°C。对于中期储存,一个月到一年,在-20°C或-80°C冷冻是更常见的冷蛋白储存形式。对于长达一年的严重长期储存,一些研究人员选择在液氮中将一次性蛋白质等分试样用于在液氮下储存在干净的塑料容器中。该方法包括将蛋白质溶液逐滴(约100μl/滴)加入液氮池中,然后收集液滴大小的冷冻珠并在液氮下将它们储存在冷冻瓶中。根据您的情况和蛋白质的特性,您可能会偏好一个存储温度和存储持续时间。请务必牢记预期的应用程序。

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